ยีนและโปรตีนในการดูแลบ้านซึ่งรวมถึงβ-Actin, GAPDH, HPRT1 และ RPLP1 มักถูกใช้เป็นตัวควบคุมภายในในบล็อตตะวันตกโดยเหตุผลที่พวกเขาคิดว่าจะแสดงออกอย่างเป็นองค์ประกอบในระดับเดียวกันในการทดลอง อย่างไรก็ตามการศึกษาเมื่อเร็ว ๆ นี้แสดงให้เห็นว่ารูปแบบของการแสดงออกของโปรตีนทำความสะอาด (HKPs) สามารถเปลี่ยนแปลงได้ตามชนิดของเซลล์และเงื่อนไขทางชีววิทยาที่แตกต่างกัน สรุปได้ว่าผู้เผยแพร่ทางวิทยาศาสตร์และหน่วยงานจัดหาทุนต้องการให้ก่อนหน้านี้มีการตรวจสอบการควบคุมการทำให้เป็นมาตรฐานสำหรับการทดสอบแต่ละครั้งเพื่อให้แน่ใจว่าผลการทดสอบสามารถทำซ้ำได้และถูกต้อง
แอนติบอดีเรืองแสง
เมื่อใช้แอนติบอดีเรืองแสงกับโปรตีนรูปภาพในบล็อตตะวันตกการทำให้เป็นมาตรฐานต้องการให้ผู้ใช้กำหนดขีด จำกัด บนและล่างของการหาปริมาณและกำหนดลักษณะความสัมพันธ์เชิงเส้นระหว่างความเข้มของสัญญาณและปริมาตรมวลตัวอย่างสำหรับแต่ละแอนติเจน ทั้งโปรตีนวัตถุประสงค์และการควบคุมการทำให้เป็นมาตรฐานจำเป็นต้องมีการเรืองแสงภายในช่วงไดนามิกของการตรวจจับ HKP จำนวนมากมีการแสดงออกในระดับสูงและเป็นที่ต้องการสำหรับการใช้กับโปรตีนที่มีการแสดงออกอย่างชัดเจน โปรตีนที่แสดงออกต่ำกว่านั้นยากที่จะค้นพบในตุ่มเดียวกัน
แอนติบอดีเรืองแสงมีวางจำหน่ายทั่วไปและแนะนำให้ใช้แอนติบอดีที่มีลักษณะครบถ้วนเพื่อให้ได้ผลลัพธ์ที่สม่ำเสมอ
ภาพ 289A | Western blot การตรวจจับสารเคมี | Bensaccount / Attribution 3.0 Unported | Page URL : (https://commons.wikimedia.org/wiki/File:Western_blot_chemiluminescent_detection.png) from Wikimedia Commons | URL: Wikimedia Commons.
ผู้เขียน : Yavor Mendel
ความคิดเห็น
แสดงความคิดเห็น