ในตัวอย่างนี้ยีนจากห้องสมุดยีนของสัตว์เลี้ยงลูกด้วยนมจะถูกย่อยเป็นพลาสมิดของแบคทีเรีย (แพลตฟอร์มปลายทาง) พลาสมิดของแบคทีเรียเป็นชิ้นส่วนวงกลม DNA ซึ่งมีองค์ประกอบควบคุมที่อนุญาตให้แบคทีเรียสร้างผลิตภัณฑ์ยีน (การแสดงออกของยีน) หากวางไว้ในตำแหน่งที่ถูกต้องในพลาสมิด สถานที่ผลิตถูกขนาบข้างด้วยไซต์ตัดเอนไซม์ที่ จำกัด "A" และ "B" สองแห่งที่มีปลายเหนียวที่เข้ากันไม่ได้
เลี้ยงลูกด้วยนม DNA ไม่ได้มากับเว็บไซต์ข้อ จำกัด เหล่านี้จึงถูกสร้างขึ้นโดยการขยายการทับซ้อน PCR ไพรเมอร์ได้รับการออกแบบมาเพื่อวางข้อ จำกัด อย่างระมัดระวังเพื่อให้การเข้ารหัสของโปรตีนอยู่ในกรอบและมีการฝังกรดอะมิโนเพิ่มเติมขั้นต่ำไว้ที่ด้านใดด้านหนึ่งของโปรตีน
ทั้ง PCR สินค้าที่มียีนเลี้ยงลูกด้วยนมที่มีข้อ จำกัด เว็บไซต์ใหม่และพลาสมิดปลายทางอยู่ภายใต้ข้อ จำกัด การย่อยอาหารและผลิตภัณฑ์ที่ย่อยบริสุทธิ์โดย gel electrophoresis
ผลิตภัณฑ์ย่อยสลายซึ่งตอนนี้มีปลายเหนียวที่เข้ากันได้กับแต่ละอื่น ๆ (แต่ปลายเหนียวที่เข้ากันไม่ได้กับตัวมันเอง) จะต้องถูก ligation สร้างพลาสมิดใหม่ซึ่งมีองค์ประกอบพื้นหลังของพลาสมิดดั้งเดิมที่มีส่วนแทรกที่แตกต่างกัน
ภาพ 274A | ภาพนี้แสดงการดำเนินการของ subcloning ตามที่ระบุไว้ทางด้านซ้าย | ผู้อัปโหลดต้นฉบับคือ Takometer ที่ English Wikipedia / Attribution 2.5 Generic | Page URL : (https://commons.wikimedia.org/wiki/File:Subcloning.png) from Wikimedia Commons
ผู้เขียน : Yavor Mendel
ความคิดเห็น
แสดงความคิดเห็น